遠古之神"大蛇"企圖滅世，因而產生了兩位救世巫女。兩位巫女經由不停的輪迴轉世，相遇後以兩人之力封印住大蛇。而原本只是普通高中生、卻是"日之巫女"的轉世"來棲川姬子"以及"月之巫女"的轉世"姬宮千歌音"，為了再次封印大蛇，不得不想辦法召喚傳說中的劍神"天叢雲"。大蛇的八個僕人們（人性的八個黑暗面）為阻止兩人召喚天之叢雲，而屢次對她們發動襲擊；這時，原本應該是大蛇之一順序七的"大神相馬"因為暗戀姬子已久，而背叛了大蛇的意志，屢次地拯救她們，但卻又引發了另一場風波。不停輪迴的兩人，無法分離的命運，這是身為「神無月之巫女」的命運...
《神無月巫女》是日本漫畫家介錯所創作的漫畫，以及依此改編的電視動畫。動畫版一共12集。
在許多的百合動畫之中，少數比較深入討論女同性戀的課題的一個。其它大部分都是以同性友情來帶過，而不像本作能夠那麼直截了當，而且十分深入地描寫到她們的心理。漫畫版及動畫版的結局部分都各留下令人遐想的空間，漫畫版內容較為嚴肅，動畫版在情感的鋪陳上較深刻。本作題作的構成元素包括日常學園、日本古代神話、巫女、法術、武術格鬥、機器人戰鬥等很多元素，在選材上採取的方向相當特殊。
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